domingo, 25 de março de 2012

 


Aula prática - Extração do DNA da cebola (Alliun cepa)
DIA 28/03/2012 - PRIMEIRAS SÉRIES.


JALECO OBRIGATÓRIO! 

OBJETIVOS
Conhecer os princípios básicos da extração do material genético da cebola, a partir dos tecidos do bulbo.

MATERIAIS
Álcool isopropílico (Isopropanol)
Cebola picada
Solução de lise (quebra): 4 colheres de sopa de detergente incolor, 1 colher de chá de cloreto de sódio, 75 mL de água.
Papel de filtro
Gelo
2 béqueres pequenos de plástico (50 mL) e 1 béquer de 500 ou 1000 mL
Tubos de ensaio
Banho-maria (~60 ºC)

PROCEDIMENTOS
Pique a cebola em pedaços pequenos;
Coloque no béquer pequeno de plástico (50 ml) 4 colheres de chá de pedaços de cebola;
Adicione 2 colheres de sopa de solução de lise;
Macere intensamente com o auxílio do bastão de madeira;
Complete com a solução de lise até 25 mL no béquer, misturando a solução;
Coe a solução, com o auxílio do funil e do papel de filtro; coloque o filtrado em um tubo de ensaio;
Depois de filtrar a solução, tampe o tubo e o coloque  no banho-maria por 15 minutos;
Em seguida, coloque o tubo no béquer com gelo e água, durante 5 minutos;
Decorrido este tempo, adicione um volume igual de isopropanol (gelado) ao do tubo e misture vagarosamente (por inversão).

SÍNTESE:

1. A cebola é macerada para que haja a ruptura da parede celular, expondo o material genético das células
2. As moléculas do detergente desestruturam as moléculas de lipídios presentes nas membranas celulares. 
O aquecimento favorece a reação e desnatura as moléculas de DNA.
3. DNA é insolúvel em álcool e deste modo se separa da solução. O DNA tem também menor densidade que os outros constituintes celulares, por isso surge na superfície da solução. O álcool desidrata as moléculas de DNA, fazendo com que elas se aglutinem.
4. A estrutura de dupla-hélice só pode ser visualizada de modo indireto e através de aparelhos sofisticados. O que você está observando são milhares de fitas de DNA juntas.
5. Pode-se observar um aglomerado de moléculas de DNA. 

Professora Gisele Rosin - Ciências e Biologia.